快速、準(zhǔn)確地定量檢測谷物、食品、飼料中的黃曲霉**。

酶標(biāo)儀檢測飼料中黃曲霉B1方案-2 概要

黃曲霉**是谷類及其他農(nóng)作物常見的霉變菌，是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類低分子化合物。污染糧食、油料作物的種子，其中以花生、玉米*易被污染，另外在小麥、高粱、巴西堅(jiān)果、豆類和大米等重要糧食中也經(jīng)常被檢出。

黃曲霉**的種類很多，主要有黃曲霉B1、B2、M1、G1，其中以黃曲霉**B1毒性*強(qiáng)，含量*高，是總黃曲霉**的重要組成部分。黃曲霉**熱穩(wěn)定性很高，一旦產(chǎn)生便難以除去。對動(dòng)物、植物和微生物具有很強(qiáng)的毒性，致癌力*強(qiáng)，還能引起突變和導(dǎo)致畸形。與人的肝癌有密切關(guān)系，也能引起人的急性中毒死亡。

鑒于這種霉菌**的毒性，歐洲國家做出了相近的限量，對黃曲霉**B1的限量為2ppb，對黃曲霉**總量的限量為4ppb。

酶標(biāo)儀檢測飼料中黃曲霉B1方案-3 測定原理

黃曲霉**檢測試劑盒是基于競爭酶聯(lián)**吸附檢測法，用甲醇/水溶液震蕩萃取粉碎樣品中的黃曲霉**，過濾水相萃取物，然后進(jìn)行檢測。加黃曲霉**的酶標(biāo)記物到微孔中，再加標(biāo)準(zhǔn)或樣品到對應(yīng)的測試孔中，加入抗體后反應(yīng)開始，樣品及酶標(biāo)記物競爭結(jié)合連接在微孔上的抗體，10分鐘培養(yǎng)后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未結(jié)合的黃曲霉**和酶標(biāo)記物。加入無色的底物溶液，培養(yǎng)10分鐘，所有結(jié)合的酶標(biāo)記物使底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)。加入停止液然后讀取吸光度值，未知濃度樣品吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值進(jìn)行比較，就可以得到樣品的黃曲霉**濃度。

酶標(biāo)儀檢測飼料中黃曲霉B1方案-4 提供的試劑

?  48孔包被有抗體的微孔板一塊（Mircrotiler Plate）

?  6瓶黃曲霉**B1標(biāo)準(zhǔn)液（Aflatoxin B1），1ml/瓶

濃度為：0ppb，0.1ppb， 0.5ppb，1ppb，2.5ppb，5ppb

?  1瓶4ml酶標(biāo)記物（Conjugate Solution）………藍(lán)色標(biāo)記

?  1瓶4ml黃曲霉B1抗體（Antibody Solution）…綠色標(biāo)記

?  1瓶7ml顯色液（Substrate Solution）……………棕色瓶

?  1瓶7ml停止液（Stop Solution）……………… 黃色標(biāo)記

（1N鹽酸，請小心取用）

酶標(biāo)儀檢測飼料中黃曲霉B1方案-5 需要的材料但盒中不提供

?  蒸餾水或去離子水

?  分析純試劑：正己烷、三氯甲烷、甲醇

?  20-200μl微量移液器及配套吸頭

?  玻璃器皿：三角瓶、燒杯、量筒、蒸發(fā)皿、滴管、分液漏斗、具塞試管、移液管等

?  定量濾紙、吸水紙等

?  感量0.01g的電子天平，小型粉碎機(jī)或碾缽

?  酶標(biāo)儀（內(nèi)置450nm濾光片）

?  計(jì)時(shí)器

6 操作者應(yīng)注意事項(xiàng)

?  使用前，請將試劑盒內(nèi)所有試劑放到室溫20-25℃下進(jìn)行溫度平衡；試劑用完后立即將其放置回2-8℃冰箱內(nèi)保存

?  試劑使用前搖勻

?  加樣時(shí)要準(zhǔn)確，直接加到小孔底部，不可有氣泡，不可加到孔壁上

?  整個(gè)加樣過程要快，保證前后反應(yīng)時(shí)間一致，若樣品數(shù)量超過20份，請用多道移液器操作

?  不要將微孔板暴露在空氣中時(shí)間過久，避免酶標(biāo)板變干，未用完的酶標(biāo)板需與干燥劑一起密閉于自封帶內(nèi)，防止受潮且避光保存于2-8℃冰箱內(nèi)

?  加樣后要輕輕震搖整板，使反應(yīng)液混勻

?  孵育時(shí)需避光

?  洗滌時(shí)要迅速，洗滌液不可溢出，以防交叉污染；每次洗滌要先用力甩干后再拍干，*后要擦干板底，以利于儀器檢測

?  不同批次測試盒中的試劑不能混用

?  甲醇、正己烷、三氯甲烷等有機(jī)試劑易燃，請小心取用和保存

?  停止液含1N HCL，需小心取用

?  雖AFB₁標(biāo)準(zhǔn)濃度很低，但是嚴(yán)格規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作不可忽視，凡接觸到標(biāo)樣的器皿都要用5%次氯酸鈉或漂白粉浸泡半天后清洗備用

?  標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下

7 樣品處理

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：配制80%甲醇/水溶液（體積比80:20）

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